연구목표

(가) 최종목표

본 연구에서는 인체에 약 1 x 10¹³개나 되는 혈소판에서 유래하여 혈관 내피세포의 기능을 조절하는 중요 분자를 탐색하여 그 작용기전을 규명하고, 궁극적으로 혈관계 질환을 조기에 진단할 수 있는 키트 개발과 치료제 개발을 목표로 하고 있다. 연구의 1단계에서는 혈관기능 조절물질 탐색 및 기전규명을, 2단계에서는 혈관질환 치료물질의 제조, 그리고 3단계에서는 혈관질환 치료물질의 효능 평가를 수행하게 된다.

(나) 단계별 목표

단계	연 구 목 표
제 1 단계 (2001.7-2004.2)	혈관기능 조절물질 탐색 및 작용기전 규명
	1) 연구모델 정립 2) 활성화한 혈소판에 유도되는 단백질의 규명 3) 혈소판과 내피세포의 부착과 활성화에 관여하는 분자의 규명 4) 후보물질(CD154, VEGF, S1P)의 작용기전 연구
제 2 단계 (2004.3-2007.2)	혈관질환 진단시약 및 치료물질의 제조
	5) 우수 후보물질 결정 6) 혈소판 활성화 초기에 발현되는 특이분자에 대한 항체 제조 7) 혈소판과 내피세포의 상호작용을 차단하는 scFv 제조
제 3 단계 (2007.3-2010.2)	혈관질환 치료물질의 효능 평가
	8) 개발된 scFv로 in vitro 특성 분석 9) 혈관질환 실험 동물 모델에 적용 10) 전임상 연구

연구내용

혈소판은 활성화하면 내피세포의 기능을 조절할 수 있는 표면 분자나 분비성 인자를 발현하는 것으로 알려졌다. 그러나 혈소판의 활성화 반응뿐만 아니라 혈소판과 내피세포의 상호작용에 대한 분자적 수준에서의 체계적인 연구가 진행될 필요가 있다. 그 연구결과를 응용하여 진단시약 개발과 치료의약품 개발에 필요한 기초연구를 수행하려는 목표를 가지고 아래와 같은 내용의 연구를 진행하고자 한다.

⼑ 제 1 단계: 혈소판 유래 혈관기능 조절 물질 탐색 및 기전연구

⼗ 연구모델 정립: HUVEC, 혈소판, CD40 자극 체계 확립 등

⼗ DNA chip과 Proteomics를 이용하여 혈소판 활성화로 유도되는 특이 유전자 및 단백질 조사

⼗ 3-D collagen gel에서 배양한 내피세포의 증식, 분화, 사멸 (Bcl-2 계열 단백질), 유전자 발현에 대한 혈소판의 영향 측정

⼗ 후보물질(CD154, VEGF, S1P)의 작용기전 연구

⼗ CD40 자극에 따른 내피세포내의 신호전달 과정 연구

⼗ 혈소판 자극에 따른 내피세포의 주요 사이토카인 분비 및 유착분자의 발현 변화를 Northern blotting, Cell-

based ELISA, 유세포분석 등을 이용해 분석

⼗ 혈소판과 내피세포의 부착에 결정적인 역할을 하는 분자를 기능 저지 항체 등을 이용하여 결정

⼑ 제 2 단계: 혈관질환 진단시약 및 치료물질의 제조

⼗ 활성화한 혈소판에 특이하게 유도되는 단백질의 결정과 단일클론항체 개발

⼗ 후보물질(CD154, VEGF, S1P)의 작용기전의 응용화 가능성 연구

⼗ 혈소판과 내피세포의 부착과 활성화에 관여하는 분자의 규명

⼗ 우수 후보 분자 결정 후 혈소판과 내피세포의 상호작용을 차단하는 scFv 제조

⼑ 제 3 단계: 혈관질환 치료물질의 효능 평가

⼗ 제 2단계에서 개발된 단일클론항체의 대량생산, 정제 및 진단 kit시약 개발

⼗ 제 2단계에서 개발된 scFv를 이용하여 확립된 모델에 적용: in vitro 특성 분석

⼗ 혈관질환 실험 동물 모델에 적용하여 in vivo 특성 분석 및 임상 치료에의 가능성 조사

⼗ 임상의사 및 타세부과제 연구진과 공동으로 전임상 연구