연구목표

(가) 최종연구목표

내피세포와 평활근세포의 생리 및 증식에 대한 NO의 기능을 밝히고 내피세포와 평활근세포에 각기 특이적으로 작용하는 프로모터를 이용하여 NOS 또는 p21을 이용한 유전자치료제를 개발함으로써 동맥경화의 치료에 이용하고자 한다.

(나) 단계별 연구목표

단계	연 구 목 표
제 1 단계 (2001-2004)	혈관질환 유전자치료용 신규 유전자 발굴
	1)내피세포와 평활근세포의 세포사멸 및 증식에 대한 NO의 기능 연구 2)내피세포와 평활근세포에서 eNOS와 iNOS의 기능적 차이 연구 3)평활근세포에서 p21발현에 대한 NO의 역할에 대한 연구
제 2 단계 (2004-2007)	혈관질환 유전자치료용 벡터 개발 및 혈관관련 세포에서 특이적 발현 검색
	4)내피세포 또는 평활근세포에 특이적으로 발현하는 프로모터와 인핸서 검색 5)eNOS, iNOS 또는 p21과 세포특이적으로 작용하는 프로모터, 인핸서를 포함하는 유전자치료제 생산을 위한 바이러스벡터 개발 6)eNOS, iNOS 및 p21 발현 검출시스템의 구축
제 3 단계 (2007-2010)	동물모델에서 새로운 유전자치료 기술의 전임상 연구
	7)벡터용 바이러스의 대량생산을 위한 기술개발 8)세포 및 동물에서의 전임상시험 9)임상 적용 가능성에 대한 연구

연구내용

⼑ 1단계(2001-2004)

NO는 강력한 세포사멸 기능을 갖고 있음이 잘 알려져 있지만 내피세포는 eNOS를 통해 NO를 항상 생성하고 있다. eNOS에 의해 생성된 NO는 내피세포의 내구성 및 탄력성 유지에 매우 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있다. 그러나 인접한 평활근세포에 대한 NO의 기능은 아직까지 확실히 밝혀진 바가 없다. 따라서 본 연구진은 다양한 세포생물학적 방법을 통해 내피세포와 평활근세포의 기능유지 및 혈관 기능조절에 대한 NO의 기능을 연구하고자 한다.

NO를 생성하는 생체내 효소는 내피세포의 eNOS와 다른 세포들에서 발견되는 iNOS이다. 동맥경화가 진행되는 염증작용 과정 중 단핵구세포에서 주로 iNOS에 의해 NO가 생성된다. 이때 iNOS에 의해 생성된 NO가 eNOS에 의해 생성된 NO와 모든 생리적 기능에서 동일한지는 아직까지 확실하지 않다. 따라서 본 연구는 내피세포와 평활근세포에서 eNOS와 iNOS의 기능에 그 차이가 있는지의 여부를 연구하고자 한다.

또한 NO가 어떻게 평활근세포의 비정상적인 증식을 억제하는지에 대해서는 잘 알려져 있지 않다. 아마도 NO가 평활근세포의 세포주기에 관여하는 요소들의 발현을 조절함으로써 평활근세포의 비정상적인 증식을 억제하는 것이 아닌가 여겨질 뿐이다. 따라서 본 연구는 세포주기에서 중요한 역할을 하는 것으로 알려진 p21의 발현에 NO가 어떠한 영향을 미치는지도 연구하고자 한다.

⼑ 2단계(2004-2007)

내피세포와 평활근세포에 특이적으로 작용하는 프로모터 및 인핸서를 검색하여 구축하고 체내로 eNOS, iNOS 또는 p21을 전달할 바이러스벡터를 구성하고자 한다. 유전자 전달을 위한 바이러스벡터로는 아데노, 렌티 또는 아데노관련 바이러스 중에서 하나 또는 그 이상을 선정할 것이다. 구축된 발현시스템이 세포 또는 체내에서 작동하는지를 확인하기 위한 검출방법도 확립하고자 한다.

 ⼑ 3단계(2007-2010)

바이러스벡터가 성공적으로 구축되면 동물모델에서의 전임상시험을 위한 바이러스벡터의 양산기술을 확립하고자 한다. 생산된 바이러스벡터를 이용하여 동물에서의 전임상시험은 물론 사람에서의 임상시험을 염두에 둔 적용가능성을 다양한 방법으로 검사하고자 한다.